細胞凋亡之所以成為人們研究的一個熱點，在很大程度上決定于細胞凋亡與臨床病毒的密切關系。這種關系不僅表現在凋亡及其機制的研究，闡明了一大類**病的發病機制，而且由此可以導致**新療法的出現。除了前兩期談到的細胞凋亡檢測方法及試劑外，今天百螢帶您來了解一下其他的檢測細胞凋亡的方法。

其他的細胞凋亡檢測

除了檢測線粒體膜電位的變化或半胱天冬酶活化之外的各種參數可用于監測細胞凋亡。例如，據報道，通過直接GSH氧化或從細胞輸出GSH降低細胞谷胱甘肽（GSH）濃度是凋亡信號傳導中的初期。減少GSH是防御自由基和維持細胞內細胞內氧化還原水平的關鍵因素。GSH在胞質溶膠中自由分布，并且在線粒體等細胞器中被分隔。線粒體GSH（mGSH）在修復和防御由氧化應激和不斷產生的活性氧（ROS）引起的損傷中起重要作用。研究表明，mGSH的消耗將引發線粒體透化和效應caspase活化的交替。為了測量還原GSH的濃度，AAT Bioquest開發了一種專有的非熒光Thiolite?Green染料，可用于Cell Meter?細胞內GSH檢測試劑盒。在活的非凋亡細胞中，綠色熒光強度通過Thiolite?Green在靶細胞的胞質溶膠和線粒體中的積累而增加。在凋亡細胞和死細胞中，Thiolite ?Green的熒光強度通過降低的GSH濃度而降低。用Thiolite?Green染色的細胞可以用流式細胞儀觀察，并且可以與其他凋亡測定結合用于多參數研究。通過Thiolite?Green在靶細胞的胞質溶膠和線粒體中的積累，綠色熒光強度增加。在凋亡細胞和死細胞中，Thiolite?Green的熒光強度通過降低的GSH濃度而降低。用Thiolite?Green染色的細胞可以用流式細胞儀觀察，并且可以與其他凋亡測定結合用于多參數研究。（使用Cell Meter?細胞內GSH檢測試劑盒對熒光強度變化的實例數據分析可在下面的圖1中找到）

圖1.在Jurkat細胞中添加喜樹堿后Thiolite?Green的熒光強度降低。Jurkat細胞進行處理過夜，不（藍線）或在37 20μM喜樹堿（粉紅色線）^? ℃，5％CO ₂培養箱中，然后染料裝載Thiolite?綠色30分鐘。使用FL1通道，用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式細胞儀測量Thiolite?Green的熒光強度。

通過膜聯蛋白V結合物檢測細胞凋亡的早期階段：

檢測細胞膜的形態變化是檢測活細胞凋亡過程早期階段的有效方法。通過檢測細胞溶質磷脂，磷脂酰絲氨酸（PS）的表達，可以實現對這些變化的監測，例如膜對稱性的喪失。在細胞凋亡的初始階段，細胞膜不穩定，使PS從細胞的細胞質側轉移到細胞膜的外部小葉，在那里它們可以通過膜聯蛋白檢測。膜聯蛋白是參與信號轉導的鈣依賴性磷脂結合蛋白家族，其優先結合PS。AAT Bioquest公司開發了一系列與我們的iFluor?染料系列結合的**Annexin V蛋白。它們共同構成PS傳感器，專門與PS結合，具有出色的光穩定性。對于更靈敏的檢測或處理小樣本或有限樣本時，請使用百螢生物的Cell Meter?PS凋亡試劑盒，其中包含Apopxin PS傳感器。Apopxin對PS的高親和力比其他基于Annexin-V的商業試劑盒具有更強的分析能力。

下面的圖2是使用流式細胞儀檢測膜聯蛋白V-mFluor Violet?450與PS在Jurkat細胞凋亡中的結合活性的實例。在活的非凋亡細胞中，膜聯蛋白V-mFluor Violet?450檢測非誘導細胞中的先天性細胞凋亡，其通常為所有細胞的2-6％。在凋亡細胞中，膜聯蛋白V-mFluor Violet?450與PS結合，PS位于細胞膜的外部小葉上，導致染色強度增加。

圖2.檢測膜聯蛋白V-mFluor Violet?450和磷脂酰絲氨酸在Jurkat細胞中的結合活性。Jurkat細胞無（藍色），或與在37 1個μM星形孢菌素（紅色）處理^? C，5％CO ₂培養箱中培養5小時后，經過染料加載用膜聯蛋白V-mFluor紫?450 30分鐘。使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式細胞儀，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下測量膜聯蛋白V-mFluor Violet?450的熒光強度。

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涉及到的產品信息

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