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西安百螢生物科技有限公司 主營:百螢生物圍繞熒光發光、熒光標記、熒光探針等技術進行產品研發,公司產品廣泛用于核酸蛋白定量、細胞凋亡研究、細胞信號通路研究、細胞及線粒體膜電位檢測、細胞器染色、活體示蹤、抗體標記等科研領域。
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公司新聞

鈣離子熒光探針Fluo4的復染方法

 
1. PBS平衡
2. PBS稀釋DAPI stock液至300nM,滴加300μL這種稀釋液于細胞上。
3. 孵育5分鐘。
4. PBS中涮洗幾次,涳干過量緩沖液,抗淬滅劑封片。
FISH復染:
鈣離子熒光探針Fluo4在dH2O中洗以去除殘留緩沖鹽溶液,有助于減少玻片上非特異背景。
1. PBS中稀釋至30nM,吸300μL滴于樣品上,塑料玻片有助于平均分配染料。
2. 黑暗室溫孵育30分鐘。
3. 去掉蓋玻片,PBS和dH2O中小心盥洗。
4. 去掉過量液體,綿紙在樣品邊緣小心吸取。
5. 蓋上蓋玻片,蠟或指甲油封片?;虬垂痰闹笇Ъ涌勾銣鐒?。
熒光顯微鏡觀察。
Rhodamine 123 染色
中文名稱:羅丹明 123
目 的:測細胞內線粒體的跨膜電位
EX/EM: 505/534
染液配制: 羅丹明123 粉劑用甲醇配制成1mg/ml的儲備液,100ul/支分裝,-20℃保存。染色時用Dulbecco’s PBS緩沖液將其稀釋為5ug/ml。
染色步驟:
培養細胞
Dulbecco’s PBS緩沖液漂洗2~3次(緩沖液預熱至室溫或37℃)
Rhodamine 123(5ug/ml) 37℃孵育1小時
Dulbecco’s PBS緩沖液漂洗2~3次
加0.5ml Dulbecco’s PBS,上機測量
Fluo-3-AM 染色 (測細胞內游離鈣離子濃度)
染液配制:Fluo-3-AM 50ug溶于45ul DMSO(Fluo-3-AM濃度 1mM),15ul/支分裝,-20℃保存。染色時用15~50mM HEPES緩沖液將其稀釋為1~20uM(如1.5ml 為10uM)。
染色步驟:
培養細胞
緩沖液漂洗2~3次
Fluo-3-AM (1~20uM) 37℃或室溫孵育0.5~1小時
緩沖液漂洗2~3次
加0.5ml 緩沖液,上機測量。



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