懸浮細胞
A. 離心收集細胞樣品于1.5ml離心管內,加入0.5ml固定液,緩緩懸起細胞,固定10分鐘或更長時間(可4℃過夜)。
B. 離心去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。洗滌期間手動晃動。
C. *后一次離心后吸去大部分液體保留約50ml液體,再緩緩懸起細胞,滴加至載玻片上,盡量使細胞分布均勻。
D. 稍晾干,使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。
E. 均勻滴上0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體,微晾干。
F. 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。
H. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發波長在350nm左右,發射波長在460nm左.
組織切片
A. 對于任何常見切片,處理至常規可以進行**染色時,或完成常規的**染色后,即可進行后續的Hoechst染色。
B. PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時宜用搖床,或手動晃動數次??稍诹装逯胁僮鳌?/span>
C. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分鐘。也宜用搖床,或手動晃動。
D. 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。
E. 將切片置于載玻片上,滴一滴抗淬滅封片液,蓋上一潔凈的蓋玻片,盡量避免氣泡。
F. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發波長在350nm左右,發射波長在460nm左右,
Hoechst 33258的吸收光譜和發射光譜,左側峰為吸收光譜,右側峰為發射光譜。
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